等電聚焦電泳

等電聚焦電泳是一種生物化學(xué)分離技術(shù)，主要用于分離和純化帶電的生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸等。相比于其他方法，等電聚焦電泳具有高分辨率、高重復(fù)性和高通量等優(yōu)勢(shì)。

1. 等電聚焦電泳名詞解釋

   等電聚焦電泳是指將待分離的大分子（如蛋白質(zhì)）在電極場(chǎng)的作用下，聚焦到等電點(diǎn)位置進(jìn)行分離的一種技術(shù)。在等電點(diǎn)位置，分子的凈電荷為零，會(huì)發(fā)生停滯或懸?，F(xiàn)象，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離。該技術(shù)需要借助等電聚焦板進(jìn)行實(shí)現(xiàn)，利用板中由多種緩沖液形成的 pH 梯度，在電極作用下使大分子濃度高的樣品在 pH 值逐漸增大的梯度中向更高 pH 值處遷移，直至達(dá)到等電點(diǎn)被分離出來(lái)。

2. 等電聚焦電泳的原理

   等電聚焦電泳利用 pH 值梯度和電場(chǎng)的作用，將帶電生物大分子沿著 pH 梯度移動(dòng)到等電點(diǎn)上進(jìn)行聚焦分離。通常使用的實(shí)驗(yàn)裝置是一個(gè)等電聚焦板，其內(nèi)部設(shè)有緩沖液隨 pH 值逐漸變化的 pH 梯度，并有正負(fù)兩個(gè)電極使緩沖液呈現(xiàn)水平方向的電場(chǎng)。將待檢測(cè)樣品施加于模板一端，通過順序施加電壓，首先對(duì)樣品中存在的離子進(jìn)行IEF（等電聚焦）的初步分離，之后可以對(duì)ISF（溶膠聚集）初始分離的多肽或者核酸片段進(jìn)一步的分離。

3. 等電聚焦電泳的特點(diǎn)

   等電聚焦電泳具有高靈敏度、高分辨率和高效率的特點(diǎn)。在 IEF 過程中通過 pH 值梯度的形成，能夠有效地將帶電小分子、蛋白質(zhì)等分離開來(lái)，在樣品量少的時(shí)候也可以準(zhǔn)確檢測(cè)。此外，等電聚焦電泳還有一個(gè)重要應(yīng)用是對(duì)已知電荷狀態(tài)的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析，如凝膠條滴液分析的方法。